Дифференциация подгрупп а1 и а2 антигена а системы ав0: биологическая основа и серологическая стратегия

Алгоритм и правила трансфузии (переливания) донорской крови и ее компонентов в плановом порядке

  1. Оформить на операцию переливания компонентов крови;
  2. Провести первичное исследование групповой и резус-принадлежности крови пациента по системе ABO с использованием . Занести данные в Журнал регистрации результатов определения группы крови и резус-фактора;
  3. Отправить в лабораторию кровь пациента для определения группы крови и резус- принадлежности, фенотипа по антигенам C, c, E, e, w, C , K, k и наличие/отсутствие антиэритроцитарных антител (по системе Kell). Результаты анализа внести на титульный лист истории болезни. Пациентам, имеющим в анамнезе посттрансфузионные осложнения, беременность, рождение детей с гемолитической болезнью новорожденного, а также пациентам, имеющим аллоиммунные антитела, производят индивидуальный подбор компонентов крови в лаборатории;
  4. В день трансфузии у пациента провести забор крови из вены: 2–3 мл в пробирку с антикоагулянтом и 3–5 мл в пробирку без антикоагулянта для проведения обязательных контрольных исследований и проб на совместимость. Пробирки должны быть маркированы с указанием Ф.И.О. пациента, № истории болезни, названия отделения, группы крови и Rh-фактора, даты взятия образца крови;
  5. Перед началом трансфузии врач должен убедиться в пригодности компонентов крови, провести макроскопический осмотр контейнера и его герметичность, проверить правильность паспортизации;
  6. Провести контрольную проверку группы крови донора и реципиента по системе ABO, а также пробу на индивидуальную совместимость: а) проба на плоскости при комнатной температуре; б) одной из трех проб: ;
  7. При совпадении результатов первичного и подтверждающего определения группы крови по системе AB0, резус-принадлежности, фенотипа донора и реципиента, индивидуальной совместимости, а также сведений об отсутствии у реципиента антиэритроцитарных антител врач выполняет биологическую пробу посредством однократного переливания 10 мл компонентов крови со скоростью 2–3 мл (40–60 капель) в минуту в течение 3–3,5 минут. После этого переливание прекращается и в течение 3 минут осуществляется динамическое наблюдение за состоянием реципиента. Данная процедура повторяется дважды;
  8. При отсутствии осложнений начать трансфузионную терапию. Осуществлять динамический кардиореспираторный мониторинг, контроль диуреза и температуры тела.
  9. Заполнить трансфузии донорской крови и (или) ее компонентов, журнал учета температуры при транспортировке донорской крови и/или компонентов (СЗП) и журнал учета разморозки свежезамороженной плазмы;
  10. После окончания трансфузии донорский контейнер с оставшейся донорской кровью и (или) ее компонентами (~5 мл), а также пробирка с кровью пациента, использованная для проведения проб на индивидуальную совместимость, подлежат обязательному сохранению в течение 48 часов при температуре 2–6 °C в холодильном оборудовании;
  11. На следующий день после трансфузии (переливания) донорской крови и (или) ее компонентов обязательно назначить клинический анализ крови и анализ мочи.

Алгоритм экстренной трансфузии (переливания) донорской крови и ее компонентов

При экстренной трансфузии (переливании) донорской крови и (или) ее компонентов необходимо использовать алгоритм согласно Приказу МЗ РФ N 183н. Правила клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов от 02.04.2013.

  1. Оформить на операцию переливания компонентов крови;
  2. Определить группу крови пациента по системе AB0 и его резус-принадлежность с помощью . Занести данные в Журнал регистрации результатов определения группы крови и резус-фактора;
  3. Определить группу крови донора в контейнере по системе ABО с помощью цоликлонов Анти-A и Анти-B (Rh-фактор устанавливается по обозначению на контейнере);
  4. Провести пробу на индивидуальную совместимость: а) проба на плоскости при комнатной температуре; б) одной из трех проб: ;
  5. Провести биологическую пробу;
  6. При отсутствии осложнений начать трансфузионную терапию. Осуществлять динамический кардиореспираторный мониторинг, контроль диуреза и температуры тела;
  7. Заполнить , журнал учета температуры при транспортировке донорской крови и/или компонентов (СЗП) и журнал учета разморозки свежезамороженной плазмы;
  8. После окончания трансфузии донорский контейнер с оставшейся донорской кровью и (или) ее компонентами (~5 мл), а также пробирка с кровью пациента, использованная для проведения проб на индивидуальную совместимость, подлежат обязательному хранению в течение 48 часов при температуре 2–6 °C в холодильном оборудовании;
  9. На следующий день после трансфузии (переливания) донорской крови и (или) ее компонентов обязательно назначить клинический анализ крови и анализ мочи.

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм действий, резус-фактора, как с помощью, таблица

Определение группы крови цоликлонами делают беременным женщинам перед родами, больным людям — до проведения хирургической операции, и когда может понадобиться переливание крови. Есть и другие способы с применением различных веществ, но этот метод самый точный и применяется чаще всего.

Что такое цоликлон

Цоликлоны для определения группы крови представляют собой антитела, получаемые по специальной технологии. Чтобы получить цоликлоны, используют лабораторных подопытных крыс. Грызунам делают инъекцию специального средства, а затем берут кровь из брюшины, она включает вещества, которые нужны для анализа.

Цоликлоны по своему составу относятся к иммуноглобулинам, они реагируют с антигенами, находящимися на оболочке эритроцитов. Типы этих веществ используются для выявления группы. Во время анализа цоликлоны разных видов вступают в реакцию с агглютиногенами, это дает возможность выявить группу и резус-фактор человека.

Препарат производят в жидком виде в бутылках по 5 и 10 мл. Каждый вид препарата обладает своими характеристиками.

Цоликлоны отличаются преимуществом перед другими сыворотками, т.к. не требуют долгой подготовки к обследованию и дают возможность сделать его быстро. Они не представляют собой человеческие клетки, ввиду чего при контакте с ними медики не смогут заразиться какой-либо инфекцией.

Подготовка к процедуре

В кабинете должна отсутствовать пыль, мухи, насекомые, которые могут помешать выполнению теста. Помещение должно быть хорошо освещено. Флакон с цоликлонами должен быть плотно закрыт, чтобы реагенты не пересохли, в противном случае достоверность анализа снизится. Для определения группы крови и резуса при помощи цоликлонов нужна специальная подготовка. В лабораторном кабинете температура воздуха может быть +15…+25ºC, в этом случае результат будет точным.

Перед анализом подготавливают нужные медицинские инструменты:

  • пробирку;
  • планшет, на который наносят реагент;
  • пипетки;
  • палочки для изъятия лабораторных образцов.

Если медицинский работник не только выполняет исследования, но и берет анализ у пациента, то надо подготовить:

  • жгут;
  • спирт для медицинской обработки;
  • одноразовый шприц;
  • пробирки;
  • ватный тампон;
  • салфетки;
  • специальный лабораторный маркер.

Как проводится исследование

Алгоритм определения группы крови цоликлонами состоит в следующем. Лабораторное тестирование осуществляется при помощи 3 видов этих веществ:

  • «Анти-A» красного цвета, такой же оттенок имеет бутыль, крышка и этикетка препарата.
  • «Анти-B» имеет синий цвет, а также крышку, бутыль и этикетку, окрашенные в синий тон.
  • «Анти-D» — бесцветный и находится в прозрачной бутылке.

При определении резус-фактора цоликлонами нельзя применять некачественные реагенты. Если флакон имеет дефекты или внутри жидкости есть осадок, то реагент потеряет свое действие. Чтобы определить группу, медицинский работник наносит цоликлоны на лабораторную пластину, выполненную в виде таблицы. Наносятся реагенты разных типов (A, B и D). Каждый образец подписывается. Цоликлон наносят на отмеченный участок. Каждый вид реагента берут своей пипеткой.

Рядом с сывороткой капают по 1 капле крови человека, затем чистой палочкой ее размешивают с реагентами. Через несколько секунд начнется реакция. Лаборант проводит наблюдение за реагентами 3 минуты. Потом можно расшифровывать результат анализа.

Расшифровка результатов

Определение типа крови с помощью цоликлонов происходит при расшифровке результатов анализов. Если в образце нет реакции склеивания, значит, в анализе нет агглютиногена данного типа. В этом случае анализ относится к 1 группе. Если клетки вступают в реакцию с реагентами «Анти-A» и «Анти-D», значит, у человека 2 тип (A).

Взаимодействие эритроцитов с цоликлонами типа «Анти-B» и «Анти-D» показывает, что у человека 3 группа (тип B). Если тельца вступили во взаимодействие со всеми видами цоликлонов, то у больного 4 группа крови (тип D). При выявлении группы крови при помощи этих реагентов не придется проводить дополнительную проверку, т.к. цоликлоны не имеют каких-либо добавок, вызывающих неправильную реакцию. Группа крови определяется в медицинском учреждении, анализ осуществляется в специальной лаборатории.

Таблица расшифровки результатов исследования:

Этот тест позволяет узнать жизненно необходимые данные о группе и резус-факторе пациента. Результаты позволяют оказать медицинскую помощь и перелить кровь больному после операции. Чтобы узнать свою группу, можно провести анализ в лаборатории любого медицинского учреждения. Информацию заносят в анкету пациента и хранят полученные данные в поликлинике в течение нескольких лет.

Какие существуют препараты цоликлонов

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты. Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор). Если же агглютинации не наблюдается, то соответственно имеется расхождение между исследуемыми антигенами и имеющимися антителами.

Как проводится оценка результатов исследования и определение групповой принадлежности?

Как уже говорилось выше, результат исследования определяется по наличию реакции агглютинации визуально или с помощью анализаторов:

  • если ее нет ни в одной из капель, значит исследуемая кровь имеет первую группу.
  • когда она наблюдается в ячейке, где расположен цоликлон анти-А, значит в исследуемой крови содержится данный антиген. Таким образом, исследуемая кровь может быть как второй (генотип АА или А0) или 4 (АВ) групп.
  • если агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, то исследуемая кровь 3 (ВВ, В0) или 4 группы.

Для проверки правильности результатов на планшетке и добавляется цоликлон анти-АВ (обладающий свойством определять и резус-фактор). Он, в какой-то мере является контрольным, так как именно по наличию в нем агглютинатов судят о правильности проведенного анализа. Если реакция произошла во всех ячейках, значит исследуемый образец относится к 4 группе крови.

Возможна ситуация, когда агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-АВ, а в других образцах ее нет. В таком случае можно говорить о неправильно проведенном анализе, и проводят повторное определение группы и резус-фактора.

Группы крови и их совместимость

В отечественной медицине группы обозначаются цифрой и называются соответственно: первая, вторая, третья, четвертая. За рубежом эту систему называют АВ0 и используют соответствующие обозначения.

Группа I (группа 0) – первая (или нулевая). У людей с кровью этой группы на мембране эритроцитов нет обоих агглютиногенов (A и B), а вот агглютинины  α  и β в плазме присутствуют.

Группа II (А) – вторая группа. Кровь этой группы содержит агглютиноген A и агглютинин β.

Группа III (B) – третья группа. В крови на эритроцитах присутствует агглютиноген B, в плазме – агглютинин α.

Группа IV (AB) – четвертая группа. На эритроцитах присутствуют оба антигена, а антител в плазме нет.

Переливать цельную кровь можно только тогда, когда кровь и донора и реципиента относится к одной группе. Для переливания также могут использоваться эритроциты (они отделяются от плазмы), в этом случае значение имеют лишь агглютиногены. Эритроциты человека первой группы крови  можно переливать всем, так как они не могут привнести антиген и спровоцировать агглютинацию. Поэтому человек с первой группой крови является универсальным донором.

Эритроциты второй группы можно переливать людям, у которых и так уже есть в крови агглютиноген А – то есть со второй и четвертой группой. Соответственно, эритроциты третье й группы можно переливать тем, у кого в крови есть агглютиноген B, это — третья и четвертая группа.

Человек с четвертой группой крови является универсальным реципиентом: ему можно переливать эритроциты от людей с любой группой крови, тогда как его кровь можно использовать для переливания только людям с такой же группой крови.

Нюансы процедуры

Точность исследования ГК и резус-фактора с помощью цоликлонов очень высока, однако порой анализ выдает неправильные результаты: причиной является фактор человеческой ошибки, когда процедуру проводят с нарушениями.

Чтобы снизить риск такой ошибки, нужно помнить о следующих аспектах:

Цоликлоны хранятся в холодильнике, оптимальный температурный режим – +2… +8 градусов по Цельсию. Если флакон распечатан, его содержимое нужно использовать в течение 30 дней, крышка должна быть плотно завинчена. Реагенты очень чувствительны к внешним воздействиям и при несоблюдении правил хранения или по истечении срока теряют свои качества, что приводит к ошибкам. Исследование проводится при ярком освещении, оптимальный режим в лаборатории – +15… +25 градусов по Цельсию

Если климатические условия не дают возможности соблюсти нужную температуру воздуха, поверхность планшета перед процедурой охлаждают

Важно не спутать, какие цоликлоны где находятся на планшете, для этой цели их местоположение обозначается на поверхности маркером. Хотя реагенты анти-А и анти-B имеют цветовое различие, после добавления крови оно практически исчезает

Следует соблюдать пропорции жидкостей: если эритроцитов будет слишком много, реакцию агглютинации будет сложнее отследить, в противоположном случае (слишком малый объем) склеивание происходит в замедлении. Нельзя допустить, чтобы две капли соединились: даже касание краями приводит к искажению результатов анализа. Если жидкости все же слились, исследование с помощью цоликлонов проводят сначала. При смешении при помощи лабораторной стеклянной палочки необходимо брать отдельный предмет для каждой изучаемой капли. Минимальная продолжительность наблюдения – 3 минуты, при неоднозначных результатах исследование длится до 5 минут.

Если жидкости все же слились, исследование с помощью цоликлонов проводят сначала. При смешении при помощи лабораторной стеклянной палочки необходимо брать отдельный предмет для каждой изучаемой капли. Минимальная продолжительность наблюдения – 3 минуты, при неоднозначных результатах исследование длится до 5 минут.

В ходе процедуры можно отметить и реакции, способные ввести в заблуждение: например, замедленное склеивание происходит при воздействии второго реагента. Когда реакция затягивается, со временем жидкость подсыхает, что сопровождается естественным выпадением эритроцитов в осадок, поэтому этот результат не считается достоверным.

Также в ряде случаев отмечается оседание кровяных телец по краям: неопытные специалисты принимают эффект за склеивание, но в действительности это случается, если планшет оставили в неподвижном состоянии, наблюдая за реакцией. Только если поверхность слегка раскачивали, результат можно считать правильным.

Также определить группу может быть сложно, если пациент страдает от одной из болезней, изменяющих свойства кровяных телец. К таким заболеваниям относят проблемы печени, селезенки, пневмонию, ожоги различной степени, сепсис. Наличие таких болезней сильно обостряет способность эритроцитов выпадать в осадок, и панагглютинация наблюдается даже при воздействии физраствора.

Справочно. Панагглютинация представляет собой искажение процесса склеивания (агглютинации). Изменение белкового состава сыворотки крови может привести к склеиванию всех со всеми.

С другой стороны, цоликлоны не вызовут агглютинацию, если пациент страдает лейкозом: при этой болезни кровяные тельца не реагируют даже на высокоактивные раздражители, такое же явление характерно для младенцев.

Важно. У близнецов и людей, перенесших операцию по пересадке костного мозга или частые переливания жидкости иной группы, может появиться кровяная химера, при которой в кровеносной системе уживаются эритроциты различных типов

В этом случае анализ особенно труден, для максимально точного определения химического состава требуется провести дополнительные лабораторные исследования с использованием специального оборудования и других способов

В этом случае анализ особенно труден, для максимально точного определения химического состава требуется провести дополнительные лабораторные исследования с использованием специального оборудования и других способов.

Типирование на плоскости

  1. Промаркируйте пластину: укажите ФИО пациента и название реагента.
  2. Нанесите на плоскость одну каплю (приблизительно 0,1 мл) реагента Анти-Д-Супер.
  3. Рядом поместите одну маленькую каплю (0,01 – 0,05 мл) эритроцитов.
  4. Чистой стеклянной или пластмассовой палочкой смешайте две капли.
  5. Подождите 10 – 15 секунд.
  6. Плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
  7. Оцените результат через 3 минуты.
Обычно характерная крупнолепестковая гемагглютинация наблюдается спустя 30 – 60 секунд, но при наличии антигена Du время реакции увеличивается. Подогревание пластины до 37 °С увеличивает скорость реакции.

О группах крови

Когда врач говорит о Вашей группе крови, то под этим от как правило подразумевает две вещи: Ваша группа крови по системе АВО и Ваш Rh (резус-фактор).

Группу крови человека определяют антигены, находящиеся на его красных кровяных тельцах. Антиген представляет собой некоторую структуру на поверхности клетки. Если она является чужеродной для организма, то на нее будет реагировать защитная система человека. Поэтому и необходимо при переливании учитывать группы крови: группа крови донора определяется в Центре крови, а группа крови больного – перед переливанием.

Система АВ0

Наибольшую важность представляет система групп крови АВО, согласно которой крови делится на группы А, В, О и АВ. Ее определяют два антигена, расположенные на поверхности эритроцитов:

  • группа А – на поверхности эритроцитов находится только антиген А
  • группа В – на поверхности эритроцитов находится только антиген В
  • группа АВ – на поверхности эритроцитов находятся антигены как А, так и В
  • группа О – на поверхности эритроцитов нет ни антигена А, ни антигена В.

Если у человека группа крови А, В или 0, то в его плазме крови имеются также и антитела, которые уничтожают те антигены, которых у самого человека нет. Примеры: Если у Вас группа крови А, то Вам нельзя переливать кровь группы В, ибо в таком случае в Вашей крови имеются антитела, которые борются против антигенов В. Если у Вас группа крови 0, то в Вашей крови имеются антитела, которые борются как против антигенов А, так и против антигенов В.

Если у человека группа крови АВ, то у него нет таких антител не имеется, поэтому ему можно переливать кровь любой группы. Поэтому носителя группы крови АВ можно назвать универсальным пациентом.

Носителя группы крови 0 с отрицательным резус-фактором в свою очередь называют универсальным донором, поскольку его эритроциты подходят для всех пациентов.

Резус (Rh)-принадлежность

Принадлежность по резус-фактору (Rh) может быть положительной (+) и отрицательной (-). Это зависит от наличия антигена D на поверхности красных кровяных телец. Если антиген D имеется, человек считается резус-положительным, а если антиген D отсутствует, то резус-отрицательным.

Если у человека резус-фактор отрицательный, то при соприкосновении с резус-положительной кровью (например, при беременности или при переливании крови) у него могут образоваться антитела. Эти антитела могут вызвать проблемы при беременности у женщины с отрицательным резус-фактором, если она вынашивает ребенка с положительным резус-фактором.

Помимо систем АВО и Rh на сегодняшний день открыто еще около тридцати систем группы крови. Клинически наиболее важными из них являются системы Kell, Kidd и Duffy. По системе Kell исследуют также и кровь доноров.

Как определяется группа крови?

Для определения группы крови ее смешивают с реагентом, содержащим известные антитела.

На основу наносят три капли крови взятые у одного человека: к одной капле добавляют тест-реагент анти-А, к другой капле — тест-реагент анти-В, к третьей – тест-реагент анти-D, т.е. тест-реагент Rh. Если в первой капле образуются сгустки крови, т.е. происходит склеивание эритроцитов (агглютинация), то у человека имеется антиген А. Если в другой капле эритроциты не склеиваются, следовательно у человека не имеется антигена В; а если в третьей капле возникает агглютинация, то это указывает на положительный резус-фактор. В этом примере у донора группа крови А, резус-фактор положительный.

Совместимость группы крови донора и реципиента имеет чрезвычайно важное значение, ибо в противном случае у реципиента могут возникнуть опасные реакции на переливание крови

Наследование групп крови

Человек наследует от отца и от матери в одинаковой степени. Поэтому наследственное вещество имеет двойную структуру: одна часть от матери, а другая от отца. Говоря о наследовании групп крови, необходимо иметь в виду, что:

  • Большинство наших генов существует в двух копиях
  • Своим детям каждый из родителей передает (на основе случайного выбора) по одной из этих копий
  • Гены встречаются в разных версиях (аллелях)
  • Некоторые из версий гена бывают более сильными, чем другие

Срок хранения Цоликлонов

Цоликлон раствор — срок годности 2 года, после вскрытия упаковки срок хранения 1 месяц

Дата выпуска указана на упаковке рядом с датой производства и другой важной информацией

Изменение диапазона температуры содержания раствора приводит к изменению цвета и появлению осадка. Такой препарат противопоказано использовать в медецинских целях.

Препарат можно использовать за 5-10 дней до срока годности, если при этом курс лечения входит в этот диапазон времени. Рекомендуется приобретать раствор с датой выпуска действующего времени.

Чтобы определить, что лекарство не пригодно к использованию необходимо:

  • Проверить дату окончания хранения раствора
  • Проверить на внешние отличительные факторы (цвет, густота раствора);
  • Осмотреть упаковку на повреждения.

Раствор и капли можно считать испорченными в том случае, если они потеряли прозрачность, приобрели или изменили цвет, обзавелись осадком на дне или стенках, или же начали источать запах.

После истечения даты пользования лекарством препарат может:

  • Высохнуть( если упаковка закрыта неплотно)
  • Разлагается (появляется заметный осадок)
  • Может навредить организму.

Изменение сроков годности лекарственных средств или условий хранения утверждается в установленном порядке на основе данных, подтверждающих обоснованность заявленных изменений.

Серию лекарственного средства проводят от даты выдачи разрешения на ее реализацию (даты выпуска). При нормальных обстоятельствах период до даты выдачи такого разрешения не должен превышать 30 суток от даты производства.